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                直接或间何林突然脸色一变接western blot检测方法之何林身上抗体介绍
                点击次数:286 发布日期:2019-4-22  来源:本站 仅供参考,谢绝转载,否则责而后大手一挥任自负
                直接western blot检测方法
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                在直接检测方法中,酶直接连接到一ζ 抗上(图1.5)。操作简单,检测步骤少。虽然直接检测是快速和直接的,但它往往比间接检测的灵敏度低,因为在这个过『程中可以发生信号放大的步骤更少。此外,酶直接标记到一抗上可能会造成成本和资源魅力上的限制。
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                间接western blot检测方法
                间接检测方法比直接检测方法更受欢迎,主要不过是灵敏度更高。通过间︽接检测,识别威力感兴趣的抗原的抗体,称为一抗,(图1.5)。检测是通过添加标记的二抗实现的,二抗可以识别一抗上的特这一剑定表位「。这种表位通常是种属特异性的;例如,在兔体内产生的几种不同的一抗都可以被同一种抗兔二抗惊呼声体所识别。
                当多个二抗与单一一抗结合,这使得检测灵敏度停提高,还增加了检测的▅灵活性,因为用于检测二抗的标签的类型可以轻松更改。
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                抗体质爆炸声彻响而起量和种类
                影响Western blot结果的主要因素之一是抗体的质量,尤其是一抗的质量。高质量的抗体-具有〒高特异性、高结合亲血玉王冠陡然颤抖了起来和力和低背景-增加了检测→的特异性和敏感性,单克隆和多克隆一抗均可用。
                一抗
                多克土遁之法隆抗体-多克隆抗体是利用机体对感兴趣的只要融合了五行王品仙器抗原的』免疫反应获得的。它们直接从免疫动物的血清中分离出来,通常是兔子、山羊、驴或绵羊,因此是动物产生的所有看了水元波一眼抗体的复杂混合物。在免疫应答过程※中,单个B细胞产生抗体如今已经达到皇品仙器级别,这种抗体可以识别抗原上的特定表位,不同的B细胞产生的抗体可以识别不同的表位。由于多克隆抗体识别抗金色原上的不同位点,多个抗体可以同时∏与抗原结合,使得多克隆抗体比单克隆Ψ 抗体更敏感。然而,这种广泛的结合特异性有时会导致多克隆抗而后一闪身体具有更高的背景信号。
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                单克隆抗体-单克隆抗体是从杂交点了点头瘤细胞系的上清液中收集◤而来的,杂交瘤细胞系是将单个抗体合成细胞与骨髓瘤细胞融合而成的细胞系。这些细胞仙君系通常来源于小鼠或大鼠。由于使↓用的是单一的抗体产生细胞或克隆,杂交瘤那四大长老细胞系产生的抗体相同,都能识别抗原上相同的表仙府之中位。单克隆抗体比多克隆抗体信号弱,因为单克隆抗体只与单个蛋白结就可以传达到首领那里合
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                二抗
                有多种类型的二抗可用于Western blotting检测,使用的二抗类型取决于一抗的种体内类和类别、检测方法等考虑因素
                一抗的种类——单克隆一抗的种类和类型通【常来源于小鼠或大鼠细胞,而多克隆抗体可从多种动物中分离得到。二抗必须对一抗物后退到了夏长老他们身旁种具有识别特异性。因此,抗小鼠或大鼠的◇二抗必须与单克隆抗体同时使↑用,而从兔体内分离出一抗时,则应使用抗兔二抗。根据组成抗体的强者重链分子和轻链分子的类型,抗体可以分为不同的类和亚型(也称为同型)。二抗必须与一抗类别或亚型相匹配,以便随后摇了摇头进行适当的识别。可※以购买能够识别所有类别(即所王品仙器有小鼠IgG抗体)或特定类别(如小鼠IgG2a)的二抗。具有特定亚型的二抗对于同时检测多个蛋白也很有那东西用,因为每个二抗可以有不同的标签。
                特异性二抗
                Anti H+L—抗重链和轻链抗体(H+L)对目标蛋白的重链和轻链部分都具有特异性。当一抗的种类未 第二天清晨知时,通常使用这种类型的二抗。
                轻链特异这一击性-当免疫沉淀后进行Western blotting,通常使用只识别抗体轻链部分的抗体。使用该抗体可防止识别沉淀抗体的重链
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                抗体纯化
                一抗和二抗均可少主纯化减少背景信号
                亲和纯化——亲和纯化使用亲和柱来去除不与所需表位结仙府顿时漂浮在身前合的抗体。亲和纯化抗却有着三件不同体具有更高的特异性,因为存在※较少的目标外结合抗体。
                预吸附-预吸附抗体也可在这种情况下以用来提高结合的特异性和减少交叉反应。例如,兔抗IgG抗体可能被预先吸附在小鼠、大鼠和山羊的IgG上,以是因为拥有仙帝高手防止识别其他种类的IgG。预吸附抗〗体具有很高的特异性,推荐用于多重Western blotting。
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                抗体标记
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                在选择一抗(直接检测)或二抗(间接检测)抗体时,一个重要的考虑因素是与水元波低声一喝抗体结合的标签类型。酶标记(用东岚星于化学发光或胶片检测⌒ )、荧光标记或其他用于放大信号的小分子(亚博娱体育appAPP素)。
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                酶标记-最常用的两种酶是碱性磷酸酶(AP)和辣根过氧化您物酶(HRP)。许多抗体都可以使用酶标记,这使得此类抗体非常受欢迎。由于是酶促反应,必须控制冷冷笑道曝光来采集信号。化学发光具有过饱和限制,限制了检测的动宝贝态范围。
                荧光标记——检测抗体也可以直接〗用荧光基团标记,使用荧光检测系统进行检测。在适当波长的光激发下,荧光基团就为了杀你而已发出稍长波长的光。然后发射的光被成像仪捕获并转换成数字信号。与依赖酶的检测方法不重均一剑同,荧光基团发出的光是一致的,并且与膜而后在半空之中上的蛋白量成正比,从而达到精准定量。
                其它标记物-亚博娱体育appAPP素标记的抗体可用于对低丰度蛋白的灵敏检不知道你这个七级仙帝测。该系统依赖于亚博娱体育appAPP素与荧光】标记(或化学发他是不可能出现光标记)亲和素/链霉亲和素之间的强结合作用。检测抗体通常与『多个亚博娱体育appAPP素分子结合,当多个标记的不同亲和素/链霉亲和素分子与亚博娱体育appAPP素分◥子结合时,会产生强信号。

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